En la determinación diferencial de enterobacterias y algunos vibrios, la reacción de Voges-Proskauer ocupa un lugar especial. La prueba se basa en la capacidad de las bacterias para fermentar la glucosa y formar acetoína.
La esencia del proceso de investigación
En microbiología, la reacción de Voges-Proskauer se usa a menudo para diferenciar dentro de la familia de enterobacterias Yersinia (incluidos los patógenos de la pseudotuberculosis y la enterocolitis), Escherichia coli y aerobios formadores de esporas. El resultado se visualiza coloreando el medio cuando se agregan ciertos reactivos.
Esta prueba pertenece a la serie IMViC (abreviatura de Indol, Methyl Red, Voges-Proskauer i Citrate) - un grupo de pruebas de identificación que incluyen definiciones diferenciales:
- con indol, basado en la descomposición del triptófano en indol, utilizado en presencia de un reactivo de Kovacs o Ehrlich;
- usandomethylroth, o rojo de metilo, que detecta un pH dado como resultado de la metabolización de la glucosa;
- Reacciones de Voges-Proskauer para la detección de acetil-metilcarbinol;
- utilización de citrato con cambio de color como resultado de la alcalinización del medio.
La esencia del proceso es la visualización de la presencia de bacterias diagnosticadas debido a la interacción de la acetoína formada por ellas con la potasa cáustica en presencia de oxígeno. El acetil-metilcarbinol se oxida a diacetilo, que forma un compuesto rojo o rosa brillante. Aumente la sensibilidad de la prueba introduciendo alfa-naftol antes de añadir potasa cáustica.
Configuración de prueba
La formulación de la reacción de Voges-Proskauer implica el cultivo preliminar de microorganismos. Se siembra un cultivo puro en el medio de diagnóstico diferencial de Clark, una variación del cual es el caldo de Clark (sin la adición de agar-agar). Se utiliza un medio ya preparado o se prepara de forma independiente. Los ingredientes incluyen:
- 5 g de peptona;
- 5 g de glucosa;
- 5g de fosfato dibásico de potasio;
- 1L destilado.
Durante el estudio, el cultivo se inocula con un asa bacteriológica estéril en un medio líquido. Cantidad - 5 ml en un tubo de ensayo más control. La incubación se lleva a cabo a una temperatura de 35-37 grados durante dos días. A continuación, se realiza un estudio de la reacción de Voges-Proskauer por etapas:
- 2, se transfieren 5 ml de caldo de cultivo a un tubo estéril.
- Añadir seis gotas de alfa-naftol (solución de alcohol al 5 %).
- Agregar 40%una solución de potasio cáustico en una cantidad de 0,1 ml, o dos gotas.
- La agitación se realiza agitando suavemente el tubo de ensayo.
- Evalúa el resultado después de 15 minutos desde el inicio del experimento.
Un método de prueba alternativo es la incubación durante la noche, cuyo tiempo se reduce a 18 horas o hasta un día. Además de este método, también se utiliza una prueba rápida: se introduce un cultivo en un asa en 2 ml del medio, se incuba durante aproximadamente cuatro horas, luego se agregan los reactivos en una cantidad igual de 2-3 gotas, se mezclan y el el resultado se evalúa después de diez minutos.
El control es uno de los agentes causales de la neumonía Klebsiella pneumoniae - cepa atcc 13883.
Evaluación del resultado
Después del tiempo requerido después de agregar los reactivos (de 5 a 15 minutos), se debe observar un color rojo cereza con una reacción positiva pronunciada, rojo y rosa - con una reacción positiva débil. No se registra ningún cambio como resultado negativo.
El exceso de potasa cáustica en una solución puede dar una imitación de una reacción positiva, tiñendo en un color cobrizo. En este caso, se debe registrar la respuesta negativa de la colonia analizada. Asimismo, la tinción de cobre aparece en los casos en que la valoración se realiza una hora después de la introducción de los reactivos.
Al evaluar el resultado, se debe tener en cuenta que el cultivo prolongado de los microorganismos estudiados (más de tres días) conduce a la acidificación del medio, lo que puede conducir a un resultado incorrecto del estudio. La reacción puede ser levemente positiva ofalso negativo.
Requisitos para reactivos de prueba
Los reactivos de Voges-Proskauer deben cumplir requisitos como la concentración correcta, la alta pureza y la estabilidad, que se logran mediante un almacenamiento adecuado.
Los kits de prueba listos para usar generalmente contienen reactivos para 100 o más usos y vienen en viales de plástico o vidrio polarizado. La calidad está regulada por la documentación pertinente.
